Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a tecnologia de phage display no mapeamento de mimetopos de Haemonchus contortus. Anticorpo policlonal de ovinos anti-H. contortus foi usado para seleção a partir da biblioteca PhD-7 Phage Display Peptide Library Kit (New England BioLabs). Após quatro rodadas, 50 clones de fagos expressando peptídeos foram selecionados e sequenciados. Dois clones que exibiram mimetopos de H. contortus foram escolhidos para imunização de ovinos: clone 6 – mimetopo de gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) e clone 17 - mimetopo da família do músculo desorganizado (Dim 1). Doze ovinos foram alocados em 3 grupos de 4 animais, da seguinte forma: G1: grupo controle, G2/GAPDH: imunizado com o clone 6 e G3/Dim1: imunizado com o clone 17. Quatro imunizações foram realizadas (0, 7, 14 e 21 dias). No dia 28 após a primeira imunização, todos os grupos foram desafiados oralmente com 2500 larvas infectantes de H. contortus . Os peptídeos mimetopos selecionados foram reconhecidos por IgG de ovinos naturalmente infectados por H. contortus. O ensaio de imunização revelou um aument dos títulos de IgG anti-fago M13, mas não ocorreu aumento de IgG anti-peptídeos mimetopos. Este é o primeiro relato de uso bem sucedido da biblioteca de Phage display para a identificação de mimetopos de H. contortus.

Abstract The aim of this study was to evaluate phage display technology for mapping Haemonchus contortus mimotopes. We screened the PhD-7 Phage Display Peptide Library Kit with a sheep polyclonal antibody against H. contortus. After four rounds of selection, 50 phage peptide clones were selected by biopanning and sequenced. Two clones displaying peptide mimotopes of H. contortus proteins were chosen for sheep immunization: clone 6 - mimotope of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and clone 17 - mimotope of a disorganized muscle family member (Dim 1). Twelve sheep were allocated into 3 groups of 4 animals as follow: G1: control group; G2/GAPDH: immunized with clone 6; and G3/Dim1: immunized with clone 17. Four immunizations were performed at intervals of seven days (0, 7, 14, and 21 days). On day 28 post initial vaccination, all groups were orally challenged with 2500 H. contortus infective larvae. The mimotope peptides selected by phage display were recognized by IgG from sheep naturaly infected with H. contortus. The immunization protocol showed an increasein IgG anti-M13 phage titers, but no effect was observed in IgG-specific for the anti-mimotope peptides. This is the first report of successful use of a phage display library for the identification of mimotopes of H. contortus proteins.

Resumo Duddingtonia flagrans tem sido testado como uma alternativa no controle de parasitos, entretanto, trabalhos in vitro da predação de nematoides por fungos nematófagos correlacionados com cálculos baseados para testes in vivo são restritos. O objetivo deste trabalho foi determinar a eficácia in vitro de D. flagrans contra larvas de nematoides de ovinos tendo como base cálculos in vivo. Amostras fecais receberam a adição do fungo em diferentes concentrações: 0.0/controle; 0,05; 0,1; 0,2; 0,4; 0,8; 1,6; 3,2 e 6,4 gramas correspondendo, respectivamente, às seguintes dosagens: 583.000; 1.166.000; 2.332.000; 4.664.000; 9.328.000; 18.656.000; 37.312.000 e 74.624.000 clamidósporos/Kg de peso vivo animal. O material foi incubado por 14 dias, para recuperação das larvas (Ensaio 1). O Ensaio 2 foi realizado com concentrações de 0,00625; 0,0125 e 0,025 g. Foi observada correlação negativa entre a concentração fúngica e o número de larvas, nos dois ensaios. O fungo demonstrou eficácia acima de 89% em ambos os ensaios. A partir destes dados, acreditamos que ensaios in vitro baseados em cálculos in vivo podem aprimorar as dosagens para a realização de experimentos a campo.

Abstract Duddingtonia flagrans has been tested as an alternative parasite control, but data from in vitro experiments based on in vivo calculations describing nematophagous fungi predation in nematodes are restricted. The objective of this work was to determine the efficacy of D. flagrans against sheep nematode larvae in vitro using in vivo calculations. Fecal samples were introduced to fungi in different concentrations: 0.0/control; 0.05; 0.1; 0.2; 0.4; 0.8; 1.6; 3.2; and 6.4 g corresponding, respectively, to 583.000; 1.166.000; 2.332.000; 4.664.000; 9.328.000; 18.656.000; 37.312.000 and 74.624.000 chlamydospores/kg of body weight. The material was incubated for 14 days, before the larvae recovery (Assay 1). Assay 2 was carried out with the doses of 0.00625; 0.0125; and 0.025 g. The results showed a negative correlation between fungal concentrations and larval numbers for both assays. The fungus demonstrated an efficacy above 89% in both assays. Thus, we consider that the data from in vitro studies based on in vivo calculations may optimize the fungi quantities for field experiments.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do extrato hidroalcoólico de Artemisia annua frente a oocistos de Eimeria sp. em camas contaminadas. O extrato foi produzido com 7 dias de percolação a 4°C, sendo posteriormente realizada a marcha fitoquímica; dosagem de fenóis totais, quantificação de artemisinina, ensaio antioxidante e teste de toxicidade. Para testar a atividade anticoccidiana, camas de aves compostas de cepilho de árvores foram contaminadas com 5000 oocistos. Foram formados quatro tratamentos, em triplicata, nos quais foram usadas diferentes concentrações, sendo G1: 12mg/mL, G2: 8mg/mL, G3: 4mg/mL e C-: água. Após a contaminação, foram aspergidos, 800 mL dos extratos nas diferentes concentrações sobre as camas e coletadas, em triplicatas, 10 cm2 de cada local, aleatoriamente, nos tempos: 0, 3, 6, 24, 48, e 72 horas após a aplicação. Nas análises fitoquímicas, foram evidenciados diversos compostos com propriedades antiparasitárias, como flavonoides e taninos. O fitoterápico continha 59,409±1,47μg/dL de artemisinina. O produto na concentração de 12mg.mL-1 apresentou eficácia entre 45,5 e 42,1%. Os resultados dos testes bioquímicos, juntamente com os encontrados no teste anticoccidiano, evidenciaram que o extrato produzido possui alto potencial para combater Eimeria sp.

Abstract The aim of this study was to determine the efficacy of hydroalcoholic extract of Artemisia annua against oocysts of Eimeria sp. in contaminated poultry beds. The extract was produced after 7 days of storage at 4°C, which was used to perform the phytochemical screening; the artemisinin measurement; the total phenolic; antioxidant testing and toxicity test. To test the anticoccidial activity, the birds space composed of shaver trees, were contaminated with 5000 oocysts. Four treatment were formed, in triplicate, were used in different concentrations as G1: 12mg/mL, G2:= 9mg/mL, G3: 6mg/mL, and C-: water. After contamination 800 mL of the herbal at different concentrations were sprayed on the bed and collected, in triplicate, 10 cm2 each site, randomly, at times: 0, 3, 6, 24, 48, and 72 hours after application. In phytochemical analysis, were shown compounds with antiparasitic properties, such as flavonoids and tannins. The herbal contained 59.409±1.47mg/dL artemisinin. The product at a concentration of 12mg.mL-1 showed efficacy from 44.25 to 40.71%. The results of biochemical tests, with the in vitro test showed that the extract has produced high potential for combating Eimeria sp.

Resumo: O controle das endoparasitoses gastrintestinais em pequenos ruminantes tem sido tradicionalmente realizado por meio do uso indiscriminado dos anti-helmínticos, porém essa prática tem resultado em grande pressão de seleção de parasitas resistentes. Métodos seletivos (ex: FAMACHA/FMC e contagem de ovos nas fezes/OPG) e que apresentem boa sensibilidade para identificar os animais que necessitam receber o tratamento químico são importantes alternativas aos métodos tradicionais. O objetivo desse trabalho foi determinar a sensibilidade e a especificidade do método FMC, usado para detectar anemia causada por Haemonchus contortus em ovinos da raça Suffolk, em duas categorias de alta suscetibilidade; cordeiros lactentes e ovelhas durante a fase de lactação. A conjuntiva ocular de 42 cordeiros lactentes e 35 ovelhas em lactação foi avaliada usando o método FMC, em intervalos de 14 dias, durante cinco meses. O hematócrito (Ht) foi utilizado como padrão-ouro para avaliação clínica de anemia dos animais. Para o cálculo de sensibilidade e especificidade, diferentes critérios foram utilizados: animais classificados como 4 e 5 ou 3, 4 e 5 e anêmicos pelo Ht (teste positivo); animais classificados como 1, 2 e 3 ou 1 e 2 e não anêmicos pelo Ht (teste negativo). Três valores de corte para Ht (≤22%, ≤19% ou ≤15%) foram utilizados para confirmar a anemia. Entre os gêneros observados nas coproculturas, H. contortus (61,5%) e Ostertagiasp (21,3%) foram os mais prevalentes. Em ambas as categorias, a inclusão do FMC 3 como teste positivo, elevou a sensibilidade mas reduziu a especificidade do método. Quando o FMC 3 foi considerado anêmico, o percentual de falsos negativos foi próximo a zero, no entanto, houve aumento no número de tratamentos aplicados em animais não anêmicos (falso positivo). Durante as avaliações, a maior parte dos cordeiros (73%) e das ovelhas (53%) permaneceu nas categorias de FMC 1 e 2. Apenas 5% dos cordeiros e 8% das ovelhas foram classificados com os dois maiores graus de anemia (FMC 4 e 5). Os resultados indicam que o FMC pode ser utilizado para identificar os cordeiros lactentes e ovelhas em fase de lactação com sinais clínicos de anemia decorrentes da infecção por H. contortus. Para ambas as categorias, foi necessário incluir o FMC 3 como positivo para aumentar a sensibilidade do método; reduzindo o risco de morte de animais anêmicos não diagnosticados (falsos negativos).

Abstract: The control of gastrointestinal parasites in small ruminants has traditionally involved the indiscriminate use of anthelmintic drugs that resulted in a high parasite selection pressure for anthelmintic resistance. Selective methods (ex.: FAMACHA/FMC and faecal egg count/EPG), which have good sensitivity to identify animals that need drug treatment, are important alternative methods for parasite control. The objective of this study was to determine the sensitivity and specificity of the FMC method to detect clinical anemia caused by Haemonchus contortus in two highly susceptible categories of Suffolk sheep; suckling lambs and lactating ewes. The ocular conjunctivae of 42 suckling lambs and 35 lactating ewes were evaluated using the FMC method at 14 days interval for five months. Hematocrit (Ht) served as the gold standard for anemia evaluation. To calculate the sensitivity and specificity of the FMC method, different criteria were adopted: animals classified as 4 and 5, or 3, 4 and 5, were considered to be anemic (positive test), and animals classified as 1, 2 and 3, or 1 and 2 were considered to be non-anemic (negative test). Three standard values of Ht (≤22%, ≤19% or ≤15%) were used to confirm anemia. Among the prevalent genera of helminths H. contortus (61.5%) and Ostertagia sp. (21.3%) were the most predominant species in the coproculture. For both categories, the inclusion of FMC 3 as a positive test increased the sensitivity but decreased the specificity of the method. When FMC 3 was included as anemic, the percentage of false negative was close to zero, but a greater number of treatments were applied to non-anemic animals (false positive). Most of the lambs (73%) and ewes (57%) remained in categories 1 or 2 throughout the trial. Only 5% of the lambs and 8% of the ewes were classified as the two major stages of anemia (4 and 5). The results indicate that the FMC is a safe method to be used in lambs and lactating ewes with clinical anemia from H. contortusinfection. For both categories, it was necessary to include FMC 3 as a positive condition to increase the sensitivity of the method and to reduce the risk of death of undiagnosed anemic animals (false negatives).

Haemonchus contortus é uma das causas mais comuns e economicamente significativas de doença em produções de pequenos ruminantes em todo o mundo, e os programas de controle de parasitas nematoides - incluindo H. contortus - baseiam-se principalmente no uso de drogas anti-helmínticas. A consequência da utilização desses compostos, como sendo a única estratégia sanitária para evitar infecções por parasitas, tem sido a redução da eficácia de todos os produtos quimioterápicos, selecionando fortemente para resistência. O desenvolvimento generalizado da resistência anti-helmíntica e a dificuldade de seu diagnóstico precoce têm sido uma grande preocupação para o manejo sustentável de parasitas no campo. O objetivo desta pesquisa foi determinar e comparar o efeito da ivermectina (IVM) e da moxidectina (MOX) em um isolado de campo selecionado de H. contortus com um estado de resistência conhecido, utilizando o teste in vitro de migração de larvas em ágar (LMTA). Larvas de terceiro estágio de um isolado de H. contortus selecionado foram obtidas a partir de culturas de fezes de ovinos infectados experimentalmente e incubadas em onze concentrações diluídas crescentes de IVM e MOX (6, 12, 24, 48, 96, 192, 384, 768, 1536, 3072 e 6144µg/mL). As curvas sigmoides de dose-resposta foram obtidas utilizando o valor de R² >0,90 e a dose de concentração letal (CL50) para as drogas anti-helmínticas testadas, utilizando um modelo logístico de quatro parâmetros. O valor de CL50 para MOX foi significativamente menor do que para IVM (1,253µg/mL e 91,06µg/mL), identificando o isolado de H. contortus como consideravelmente menos suscetível à IVM em comparação à MOX. Além disso, o LMTA mostrou uma alta consistência (p<0,0001) e pode ser uma ferramenta útil de diagnóstico para monitorar o status de resistência de IVM e MOX em isolado de campo de H. contortus, assim como ser utilizado de forma oficial e em rotina para programas de monitoramento das drogas sob a demanda do Ministério da Agricultura (MAPA).

Haemonchus contortus is one of the most common and economically significant causes of disease in small ruminants worldwide, and the control programs of parasitic nematodes - including H. contortus - rely mostly on the use of anthelmintic drugs. The consequence of the use of this, as the sole sanitary strategy to avoid parasite infections, was the reduction of the efficacy of all chemotherapeutic products with a heavy selection for resistance. The widespread of anthelmintic resistance and the difficulty of its early diagnosis has been a major concern for the sustainable parasite management on farms. The objective of this research was to determine and compare the ivermectin (IVM) and moxidectin (MOX) effect in a selected field strain of H. contortus with a known resistance status, using the in vitro larval migration on agar test (LMAT). Third stage larvae of the selected isolate were obtained from faecal cultures of experimentally infected sheep and incubated in eleven increasing diluted concentrations of IVM and MOX (6, 12, 24, 48, 96, 192, 384, 768, 1536, 3072 and 6144µg/mL). The dose-response sigmoidal curves were obtained using the R² value of >0.90 and the lethal concentration (LC50) dose for the tested anthelmintic drugs using a four-parameter logistic model. The LC50 value for MOX was significantly lower than IVM (1.253µg/mL and 91.06µg/mL), identifying the H. contortus isolate as considerably less susceptible to IVM compared to MOX. Furthermore, the LMAT showed a high consistency (p<0.0001) and provided to be a useful diagnostic tool for monitoring the resistance status of IVM and MOX in H. contortus field isolate, as well as it may be used for official routine drug monitoring programs under the Ministry of Agriculture (MAPA) guidance.

A infestação por Rhipicephalus (Boophilus) microplus é responsável por grandes perdas econômicas em países produtores de bovinos nas áreas tropicais e subtropicais. Usos indiscriminados de acaricidas químicos têm contribuído para o aparecimento da resistência dos ixodídeos a múltiplas drogas, representando um sério problema no controle de carrapatos. As flores da planta Sambucus australis, conhecidas pelo nome popular de sabugueiro do Brasil, são usadas, na forma de infusão ou emplastros, na medicina popular como diurético, antipirético, antiinflamatório e laxativo; também empregado no tratamento de doenças respiratórias em humanos. O objetivo principal deste trabalho foi avaliar o potencial in vitro de extratos de folhas de S. australis, como agente carrapaticida. O extrato etanólico a 70% foi dessecado e retomado parte em etanol a 70% ou em água destilada, numa concentração final de 2% (0,2mg-1). No biocarrapaticidograma obteve-se resultados de eficácia entre 34% e 66% para o extrato de folhas diluído em água e etanol a 70%, respectivamente. Esse estudo é o primeiro relato de ação carrapaticida de S. australis. Estudos adicionais para determinar os metabólitos ativos, em diferentes estágios de S. australis, fornecerão subsídios para identificar os extratos apropriados a serem testados no controle do R. (B.) microplus.

Parasite infections caused by Rhipicephalus (Boophilus) microplus are responsible for the most of economic losses in producing-cattle countries in tropical and subtropical areas. Indiscriminate uses of chemical acaricides have contributed with the appearance of tick resistance to many drugs available in the marketplace, and it is a serious problem in the tick control. Flowers of Sambucus australis (South America), called "sabugueiro-from-Brazil", are used on infusions or decoctions forms in the folk medicine with diuretic, antipyretic, anti-inflammatory, and laxative purpose, also employed for treating respiratory diseases in human. The main goal of this study was to evaluate in vitro potential of S. australis leaves extracts as an acaricide agent. Ethanol extract at 70% has been dehydrated and a fraction was suspended in 70% ethanol or in distillated water at final concentration of 2% (0.2mg-1). Using the immersion test of engorged females the efficiency results were obtained in 34% and 66% with the leaves extract diluted in water and 70% ethanol, respectively. This study is the first report on acaricidal activity of S. australis against cattle tick. Further studies to determine the active metabolites in different stages of S. australis could aid to identify suitable extracts to be tested in the R. (B.) microplus control.

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade acaricida in vitro de extratos vegetais de Glechon spathulata (manjeroninha do campo) sobre teleóginas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Fêmeas ingurgitadas desse carrapato foram coletadas de bovinos mestiços de uma propriedade do município de São Pedro do Sul, Rio Grande do Sul, Brasil. A experimentação in vitro consistiu na realização de testes de imersão de fêmeas ingurgitadas. O extrato bruto seco e a fração clorofórmica utilizados nos testes in vitro foram preparados na concentração de 2% e diluídos em água e etanol, sendo todos os tratamentos realizados em triplicata. O extrato bruto seco de G. spathulata retomado em etanol a 70% apresentou uma eficácia média de 99%, enquanto que quando o mesmo extrato foi diluído em água, demonstrou eficácia média de 72%. Observou-se que no controle etanol a 70% houve diferença na eclodibilidade dos ovos, porém não interferiu no peso da postura. A fração clorofórmica de G. spathulata não apresentou eficácia no ensaio efetuado. Os resultados obtidos nesse estudo demonstraram que o extrato hidroetanólico a 70% de G. spathulata apresenta eficácia acaricida in vitro. Este estudo é o primeiro relato de ação acaricida de G. spathulata.

The aim of this study was to evaluate the in vitro acaricide efficiency of Glechon spathulata extracts on engorged females of Rhipcephalus (Boophilus) microplus. Engorged ticks were collected from crossbred cattle from one farm in São Pedro do Sul municipality, Rio Grande do Sul, Brazil. in vitro experiments consisted on the immersion tests of engorged females in solutions of G. spathulata, where treatments were made at triplicate with fractions and extracts at 2% concentration, diluted in water and ethanol. Crude dry extract of G. spathulata suspended in 70% ethanol presented an efficiency average of 99%, while the same extract diluted in water demonstrated efficiency average of 72%. It was observed in 70% ethanol control difference in egg eclodibility; however there was no interference in egg weight. The chloroform fraction of G. spathulata showed no efficacy in the test. The results obtained suggest that the hydroethanolic extract at 70% of G. spathulata has significant acaricide activity in vitro. This research is the first communication of acaricidal effect of. G. spathulata.

O objetivo desse estudo foi o de avaliar a eficácia acaricida in vitro do extrato aquoso e etanólico a 70% da Tropaeolum majus em teleóginas do Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Extrato das partes aéreas (caule e folhas) e de flores foram testados na concentração final de 2%. A coleta de teleóginas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus foi realizada em propriedades do município de São Francisco de Assis e São Pedro do Sul, Rio Grande do Sul, Brasil. O extrato das partes aéreas em etanol a 70% alcançou eficácia de 99,1%. Esse estudo é o primeiro relato de ação carrapaticida de Tropaeolum majus.

The aim of this study was to evaluate the in vitro acaricide effect of aqueous and ethanolic extracts of Tropaeolum majus on Rhipicephalus (Boophilus) microplus engorged females. Extracts from the aerial parts (stems and leaves) and from the flowers were tested at a final concentration of 2%. The Rhipicephalus (Boophilus) microplus engorged females were collected in farms in two municipalities (São Francisco de Assis and São Pedro do Sul), in Rio Grande do Sul state, Brazil. An efficacy of 99,1% was found using extract of aerial parts in ethanol at 70%. This is the first report of acaricidal effect of Tropaeolum majus.